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产品概述

细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂,适用于大肠杆菌表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎,有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase Ⅰ 和蛋白酶抑制剂混合物 , 可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的黏稠现象 , 有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物活性,可进行IP,Western Blot,蛋白纯化等下游操作。

包装信息

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操作流程

细菌可溶性蛋白提取
1. 5000g离心10min,收集菌体。
2. 可选步骤:每1ml细菌抽提试剂中加入1μl DNase Ⅰ(1000 U/ml)、2μl Lysozyme(50 mg/ml)和 10μl 蛋白酶抑制剂混合物,涡旋震荡混匀。
3. 按照每克菌体沉淀加入20ml细菌蛋白抽提试剂的比例,即按照1:20的比例,向菌体沉淀中加入抽提液,充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
4. 重悬后,室温孵育10-15min(放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
5. 4 ℃, 15000g离心15min。
6. 转移上清至新的离心管中(上清中即为可溶性蛋白),进行蛋白定量及下游实验。
注意:如过表达的大部分蛋白仍在沉淀中,目的蛋白可能以包涵体形式存在,可使用包涵体蛋白溶解液 (WLA075)进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。

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