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病毒包装

1. 慢病毒包装

      慢病毒(Lentivirus)载体是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,该载体的毒性基因已经被剔除,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达的效果。区别于一般的逆转录病毒载体,它对于分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,在基因治疗、药物研究等方面具有广泛应用。

      万类生物可进行mRNA、lncRNA、microRNA以及circRNA的干扰与过表达慢病毒包装,严格把控基因设计、载体构建、慢病毒包装的每一环节,最终提供目的基因慢病毒1mL,并保证病毒滴度达到1×108TU/mL。

包装优势:

(1)感染范围广:可有效感染分裂和非分裂的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;

(2)表达时间长:可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现目的基因长时间稳定表达,是细胞实验的首选;

(3)免疫原性低,安全性高。



2. 腺病毒包装

      腺病毒(Adenovirus)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。腺病毒载体可携带大容量的基因片段,且感染细胞时不会整合到染色体中,安全性高,在基因治疗、基础生命科学等领域被广泛应用。

      万类生物可进行mRNA、lncRNA以及microRNA的干扰与过表达腺病毒包装,以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架,对克隆、包装、扩增等各部分条件进行优化,具有克隆阳性率高、质量可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等特点,病毒滴度可达1×109pfu/mL,可满足各类实验的需求。

包装优势:

(1)宿主范围广:几乎可以感染所有类型的细胞,包括分裂细胞和非分裂细胞;

(2)病毒滴度高:可产生滴度为1×109pfu/mL的病毒,能够高效率感染细胞;

(3)包装容量大:可插入大于3kb外源基因片段;

(4)感染细胞时,不整合到染色体中:不存在激活致癌基因或插入突变等危险,生物安全性高;

(5)腺病毒具有嗜上皮细胞特性:因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。


3. 腺相关病毒包装

      腺相关病毒(Adeno-Associated virus,AAV)属于微小病毒科,是一种无包膜的单链线状DNA病毒,对分裂和非分裂细胞均具有感染能力。重组腺相关病毒(rAAV)是利用AAV2型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体,具有AAV2型的稳定表达和基因整合能力,同时也获得了不同血清型的组织感染嗜亲性,表现出一定的器官靶向性。且感染温和,免疫原性小,扩散性良好,安全性高,主要应用于动物体内注射。

      万类生物可进行mRNA、lncRNA以及microRNA的干扰与过表达腺相关病毒包装,具有高滴度、高纯度、高稳定性等特点,病毒滴度可达1×1012VG/mL。

包装优势:

(1)表达时间长:rAAV在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达3-6个月以上;

(2)特异性强:rAAV不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力,包含中枢神经、肌肉、心脏、肺、肝脏、眼、脑组织等,是动物实验的首选;

(3)扩散性强:rAAV的体积小、滴度高,具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性,可以穿透血脑屏障,是最理想的神经元和胶质细胞感染工具;

(4)宿主范围广:能感染分裂细胞和非分裂细胞;

(5)安全性高:迄今为止未发现野生型AAV对人体致病,重组AAV基因序列上去除了大部分的野生AAV基因组元件,进一步保证了安全性;

(6)免疫原性低:便于用常规的重组DNA技术进行操作,在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制;

(7)物理性质稳定:在60℃不能被灭活,能抗氯仿。



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