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产品概述

本试剂盒用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后续实验。

包装信息

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操作流程

1. 细胞及组织裂解。
a. 贴壁细胞。吸尽培养液,每10平方厘米细胞加入 1ml Trizol。一般六孔板每孔加 1ml Trizol,12孔板每孔加 0.5ml Trizol。晃动3-5次,再用枪吹打2-3次,确保全部裂解,然后吸至离心管中。
b. 悬浮细胞。离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万细胞加入 1ml Trizol。用枪吹打或适当涡旋,确保全部裂解。
c. 组织。先将组织剪切成小块,放入普通玻璃匀浆器内。每 50mg-80mg 组织加入 1ml Trizol,匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况,推荐先液氮冷冻组织块,然后在低温下用研钵研碎组织,再加入Trizol进行总RNA抽提。
2. 对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g 4℃离心 10min,然后吸取澄清的Trizol裂解产物至一新的离心管中。
3. 室温放置 5min,使样品充分裂解。
4. 每毫升Trizol 加入 0.2ml 氯仿,涡旋混匀或猛烈晃动 15s,室温放置 2-3min。
5. 12,000g 4℃离心 15min,然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中。
6. 按每毫升最初的Trizol 加入0.5ml 异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀 10min。如果希望提取microRNA等小 RNA,推荐-20℃沉淀过夜。
7. 12,000g 4℃离心10min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。
8. 加入 1ml 75%乙醇(DEPC水配制),涡旋或颠倒混匀。
9. 7500g 4℃离心 5min,弃上清,小心吸尽液体。
10. 待RNA略干后,加入 20μL DEPC水溶解,-80℃冻存。

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服务热线

400-602-0407

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