老师，您好！已通过电话与您沟通了解到样本信息和基本实验条件。通过分析，主要是上样量太大，出现的非特异条带。建议减少蛋白上样量。一般来说：1、WB上样量30-50微克即可；2、 电泳80V 1h之后120V溴酚蓝跑到底；3、 转膜条件:湿转100V1.5h；4、 封闭液可以换成5%脱脂奶粉,一抗二抗都可以用脱脂奶粉稀释。（可能效果会好）；5、 缩短二抗孵育时间，室温45min即可；6、 根据信号强弱调节曝光时间30S-2MIN。如果还有问题，可以随时联系我们。

感谢您的支持与信任，实验中有什么问题可以随时跟我们联系！