Hoechst 33258，也称bisBenzimide H33258，它是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm， 最大发射波长为461nm。封片后在荧光显微镜下观察细胞凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
包装信息
1. 对于固定的细胞或组织：
(1) 贴壁细胞
a. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5min或更长时间，用细胞培养基PBS或0.9%NaCl洗涤3遍，再用细胞培养液洗涤1遍。将盖玻片置于6孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
b. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10min或4℃过夜。
c. 去固定液，用 PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min，吸尽液体。
d. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5min。也宜用摇床，或手动晃动数次。
e. 用PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min，之后用抗淬灭封片液封片。
(2)悬浮细胞
a. 离心收集细胞样本于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10min或4℃过夜。
b. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min。
c. 离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
d. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动，均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5min。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
e. 用PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min，之后用抗淬灭封片液封片。
(3)组织切片
对于任何常见切片，处理至常规可以进行免疫染色时，或完成常规的免疫染色后，用PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min，即可进行后续的Hoechst 33258染色，染色5-10min，用PBS或0.9%NaCl洗涤2遍，每次3min，之后用抗淬灭封片液封片。
2. 对于活细胞或组织：
a. 加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔 需加入100μl染色液。
b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30min。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
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