PCR Mycoplasma Test Kit应用聚合酶链式反应技术(PCR)对支原体16s-rRNA基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。该方法可以在数小时内得到结果,与传统的选择性培养基培养检测方法相比较,本方法更快速,灵敏度和特异性更高,不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染问题。
包装信息
注:当细胞生长至80-90%时可以取样进行检测,培养液中的青霉素和链霉素不会影响检测效果。
1、收取待检样品(贴壁细胞:细胞生长至80%左右即可,送检细胞不能用消化液消化细胞,可以使用细胞刮刀刮取细胞;悬浮细胞:细胞生长至80%左右即可),取150μl(约1~3×105细胞数)至离心管,沸水浴10min。
2、将煮沸过的细胞悬浮液12000rpm离心2-5min。
3、取上清4μl作为PCR反应模板。
4、充分融化PCR反应液,按下列表格配制反应混合液,并以21μl/管分装至PCR反应管中。
5、每个PCR反应管中加入处理好的样品4μl,DNA阳性对照和阴性对照各加入4μl/管。
6、将所有PCR反应管放入PCR仪,参照以下参数运行PCR仪。
7、取10μlPCR扩增产物,在1%琼脂糖凝胶上直接点样(注:无需再加溴酚蓝,扩增产物已包含溴酚蓝),120v电泳20分钟(可根据电泳仪的情况,适当调整参数)。
8、EB染色观察。