谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解的酶,它特异地催化还原型谷胱甘肽 (GSH)对氢过氧化物的还原反应。一般认为它在细胞内能清除有害的过氧化物代谢产物,阻断脂质过氧化链锁反应, 从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。此酶含硒,硒是GSH-PX的必要组成部分。每克分子酶含4g分子原子硒。 GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸。测定GSH-PX活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。 本试剂盒具有操作简便、稳定性好等优点,可测定动物血液、组织、培养细胞、细菌、植物组织等,效果均佳。
包装信息
一、试剂配制:
试剂一应用液 : 用时取0.1ml加双蒸水至10ml,现用现配,需多少配多少,4°C保存。
试剂二 : 先向甲粉试剂中加入90-100°C的热双蒸水(50T 加入85ml;100T 加入170ml),充分完全溶解。然后将
已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液,室温静置冷却后,如有结晶,则取上清进行实验,4°C或室温保存6个
月。
试剂三应用液:用时加双蒸水进行溶解(50T 加入100ml;100T 加入200ml),避光4°C保存6个月。
试剂四应用液:用时加双蒸水50ml进行溶解,避光4°C保存6个月。
试剂五应用液:用时每支加双蒸水10ml溶解,避光4°C可保存5天。
GSH标准品溶剂应用液:按GSH标准品溶剂贮备液:双蒸水=1 : 9 即10倍稀释配成应用液,现用现配,4°C保存。
10mmol/L GSH标准品溶液的配制:GSH的分子量为307,每次测定前将10mg的GSH标准品加入到3.25ml的
GSH标准品溶剂应用液中,混匀,现用现配。
1mmol/L标准品溶液的配制:取10mmol/L GSH标准品溶液1ml加入GSH标准品溶剂应用液9ml,现用现配。
20µmol/L GSH标准品溶液:取10mmol/L GSH标准品溶液0.02ml加入GSH标准品溶剂应用液9.98ml,现用现配。
二、样本前处理。
a. 血清(浆):直接取原液进行检测。
b. 全血:取肝素抗凝全血20µl , 加双蒸水稀释至1ml,配成1:49的溶血液,充分混匀直至透亮为止。
c. 组织:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1 : 9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械
匀浆,2500rpm离心10min,取上清液进行测定。
d. 细胞:将培养细胞消化,1000-1500rpm离心10min,弃上清,加0.3-0.5ml生理盐水制备成细胞悬液再进行破碎
(匀浆器匀浆、超声粉碎器或反复冻融3次进行破碎)。
e. 培养上清:悬浮细胞需1000-1500rpm离心10min,收集上清进行测定;贴壁细胞可直接吸取上清进行测定。
三、最佳取样量的参考值。
(1)血清(浆)样本:取待测血清(浆)0.1ml。
四、 酶促反应 : 以全血样本为例(试剂一应用液提前在37°C预温)
五、显色反应 :
六、计算公式: