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产品概述

Whole Cell Lysis AssayLysis Buffer便Western BlotIP

包装信息

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操作流程

Ⅰ 细胞蛋白提取
1. 贴壁细胞:用预冷的1xPBS洗2-3次, 以洗去培养液。
2. 悬浮细胞:将细胞及培养液移至预冷的离心管中,离心10min(1000rpm)后,弃上清。
3. 将预冷的Lysis Buffer按每1ml加入10μl PMSF的比例混匀备用,Lysis Buffer加入量参考下表。
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4. 用细胞刮(沉淀振荡)充分破碎细胞,将其倒入离心管中超声;如果没有超声仪,冰上裂解30 min。

5.12000rpm,4℃离心 , 10min,上清为全蛋白提取物,可进行蛋白定量。

6. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 组织蛋白的提取

1.取新鲜组织 , 用预冷的1xPBS洗2-3次。

2.将组织剪成小块 , 放入预冷的研钵中 , 倒入液氮充分研碎。

3.将预冷的Lysis Buffer 按每1ml 加入10μl PMSF的比例混匀备用。

4.每100mg组织应加入0.5-1mlLysis Buffer ,充分研磨。如果粘度过大则再需加入一定量Lysis Buffer再次研磨,之后进行超声。

5.12000rpm,4℃离心 , 10min,上清为全蛋白提取物,可进行蛋白定量。

6.分装保存于-70℃,避免反复冻融。



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