本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种植物组织中的基因组DNA。植物组织材料经液氮研磨后,加入裂解液释放基因组 DNA, 再结合 DNA 制备膜技术纯化基因组 DNA,提取的基因组DNA片段 大 ,纯 度高 ,质量稳定可靠 。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作 ,包括酶 切、PCR、文库构建 、Southern杂交等实验。
包装信息
使用前请先在漂洗液PW中加入60ml无水乙醇 。
1. 处理材料:取植物新鲜组织100mg或干重组织20mg , 加入液氮充分碾磨。加入500μl缓冲液LP1和6μl RNase A(10 mg/ml) , 旋涡振荡1min , 室温放置10min。
2. 加入130μl缓冲液LP2 , 充分混匀 , 旋涡振荡1min。
3. 12,000 rpm离心5min , 将上清移至新的离心管中。
4. 加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500μl的上清液加750μl缓冲液LP3) , 立即充分振荡混匀15s , 此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中) , 12,000 rpm离心30s , 倒掉废液 , 吸附 柱AC放入收集管中。(注:如果溶液较多,需要分两次过柱,每次过柱体积不得超过700μl。)
6. 向吸附柱AC中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) , 12,000rpm离心30s,倒掉废液 , 将吸附柱AC放入收集管中。注意:如果吸附柱膜呈现绿色 , 向吸附柱CB3中加入500μl 无水乙醇 , 12,000rpm离心30s , 倒掉废液 , 将吸附柱AC放入收集管中。
7. 重复操作步骤6。
8. 将吸附柱AC放回收集管中 , 12,000rpm离心2min , 倒掉废液。将吸附柱AC置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9. 将吸附柱AC转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE(加热至65℃时使用有利于提高洗脱效率),室温放置2-5 min,12,000rpm离心2min,将溶液收集到离心管中。注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱AC中,室温放置2min,离心2min。
DNA浓度及纯度检测
1. 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2. DNA应在OD260处有显著吸收峰 , OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。