谷丙转氨酶(ALT)在37℃及PH7.4条件下,作用于丙氨酸及α-酮戊二酸组成的底物,生成丙酮酸及谷氨酸。反应30min后(固定时间)加入2,4-二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液,既中止反应,同时DNPH与酮酸中羰基加成,生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色,于505nm比读吸光度并计算酶活力。
包装信息
1. 试剂配制 :
0.4mol/L NaOH 溶液的配制 : 临用时按4mol/L NaOH 溶液:双蒸水=1:9 的比例稀释,需多少配多少 , 室温 密封保存。
2. 操作表:
混匀,室温放置5min,波长505nm,光径1cm,双蒸水调零,测定各管吸光度OD值,以(绝对
OD值=测定管 OD值-对照管OD值),查标准曲线,求得相应的ALT/GPT活力单位。
附肝脏样本前处理:
准确称取组织重量,按重量(g):体积=1:9 的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水条件下机械匀浆,制备成10%的组织匀 浆,2500转/分,离心10分钟,取上清液,再用生理盐水10倍稀释成1%的浓度待测。(同时取部分上清液测蛋白浓度,蛋白定量 试剂盒本公司有售,货号为WLA004)