真菌基因组DNA提取试剂盒(Fungi Genomic DNA Extraction Kit)可以从真菌组织细胞中提取基因组DNA, 提取得到的基因组DNA可用于PCR反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种分子生物学实验。
包装信息
1. 收集约100-200mg的菌,将其置于玻璃匀浆器内,加入400ulDNA提取缓冲液研磨,之后转至1.5ml离心管内,加入100ul 2.5mg/ml溶菌酶,室温放置1h。
2. 向离心管内加入50ul Buffer A,5ul 20mg/ml蛋白酶K,55℃孵育1h,期间震荡几次离心管。
3. 向离心管内加入200ul Buffer B,750ul Buffer C,震荡混匀10min,10.000rpm离心10min。
4. 将最上层的上清液转移至新的1.5ml离心管中,加入750ul Buffer D,震荡混匀,12.000rpm离心10min,弃上清加入预冷的500ul 75%乙醇,洗涤一次沉淀,10.000rpm离心10min。
5. 室温放置几分钟待乙醇挥发,加入50ul的灭菌蒸馏水或者TE溶解DNA 。
6. 将提取到的基因组DNA可通过电泳或吸光度测定以定量。之后将其保存于-20℃。
7. 向沉淀中加入冰上保存的Buffer C工作液,溶解沉淀。
8. 4°C,12000rpm离心10min ,转移上清液至新管中。
9. BCA法进行蛋白定量。
10. 分装保存于-70°C,避免反复冻融。