彗星实验,亦称单细胞凝胶电泳分析(SCGE),是一种常见的测量单个细胞DNA损伤的技术。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在电泳磁场下,受损细胞的DNA向正极迁移形成“彗星”状图像,而未受损伤的DNA部分保持球形,显微镜下可观察到形如 “彗星”一样的“尾巴”,DNA损伤越严重,“彗星尾巴”越长。亦可通过图像分析软件来测量各种参数。
包装信息
1. 载玻片上铺一薄层正常熔点的0.5%琼脂糖,放置使凝固。
2. 细胞悬液与2%低熔点琼脂糖1:1混合后,铺于上述载玻片上,放置使凝固。
3. 待含有细胞的琼脂糖凝固之后,浸泡于PH 10.0的裂解缓冲液中1.5h,用预冷的双蒸水洗3遍,每20min。
加60ml左右双蒸水溶解后,用NaOH调节PH至10.0,定容至100ml,4℃保存备用。
4. 在预冷的电泳缓冲液中孵育45min,25V电压下电泳25min。
1X 电泳缓冲液配制: 向50ml 20X电泳缓冲液中加入850ml双蒸水, 溶解后, 用NaOH调节PH至12.8, 定容至1000ml, 4℃保存备用。
5. 电泳完成后浸入中和缓冲液中和1h。
中和缓冲液配制: 向50ml 10X中和缓冲液中加入400ml双蒸水, 溶解后, 用HCl调节PH至7.5, 定容至500ml, 4℃保存备用。
6. 用DNA染料色15min,之后用PBS冲洗3次,每次5min。
7. 荧光显微镜观察,拍照。
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