酸性磷酸酶又称酸性磷酸单酯酶,简称ACP。此酶在酸性条件下催化醇和酚类磷酸酯的水解。酸性磷酸酶广泛分布于机体各组织中,它主要位于溶酶体内。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)是破骨细胞的特异性标志磷酸酶,通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。抗酒石酸酸性磷酸酶染色,又称TRAP染色,是用于检测破骨细胞的染色。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)在含有酒石酸的酸性条件下将AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI,与显色剂结合,在酶活性部位形成酒红色沉淀。
包装信息:
1. 石蜡切片脱蜡至水:切片依次经二甲苯15 min,更换新鲜的二甲苯15 min,无水乙醇5min,新鲜无水乙醇5 min,90%乙醇1 min,80%乙醇1 min ,70%乙醇1min,蒸馏水水洗3次,每次5min。
2. 切片上滴加蒸馏水将组织完全覆盖,放置于湿盒中,37℃孵育2h。
3. TRAP染色工作液的配置:
(1)将副品红溶液与亚硝酸钠溶液按照1:1的比例进行混合。
(2)向第(1)步混合均匀的溶液中加入等量的AS-BI磷酸盐溶液,充分混匀。
(3)将第(2)步的混合溶液与TRAP反应缓冲液按照1:9的比例进行混合,充分混匀。
(4)将第(3)步的混合液进行过滤,即为 TRAP染色工作液。
4. 切片孵育完成后,去掉组织上的蒸馏水,滴加TRAP染色工作液,避光37℃孵育30min。
5. 去掉组织上的TRAP染色工作液 ,用蒸馏水洗2次,每次5min。
6. 核复染:切片入核染液染色1-2 min(可以根据染色结果及要求进行时间调整),蒸馏水洗,分化液分化1-2s, 自来水返蓝。
7. 切片入无水乙醇脱水5 min,更换新的无水乙醇再脱水5 min,经二甲苯透明5 min,更换新鲜的二甲苯再透明5 min。滴加中性树胶封片。
结果解读:破骨细胞周围或胞浆部分呈现酒红色,细胞核为蓝紫色。