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产品概述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的组织和细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。RIPA裂解液(强)提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。RIPA裂解液的配方有很多种 , 根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100, 1%sodium deoxycholate,0.1%SDS , 以及sodium orthovanadate,sodium fluoride, EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。


操作流程

一、细胞样品
1、贴壁细胞蛋白抽提
(1)小心倾去贴壁细胞的培养液。
(2)可选步骤:若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果,请先用预冷的 PBS漂洗细胞。

(3) 加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入PMSF),在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1。

(4)将RIPA裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20min,使细胞充分裂解。
(5)14000×g,离心10min,转移上清液至新管中,进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
(1)悬浮细胞2500×g 离心5min,弃去上清。
(2)可选步骤:若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质,请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min,弃去上清。
(3)加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入PMSF),每5×106 细胞加入约200-500µl RIPA裂解液,吹打均匀。
(4)冰上放置20min,使细胞充分裂解。
(5)14000×g, 离心10min,转移上清液至新管中,进行下一步分析。
二、组织样品
1.取适当的RIPA裂解液,在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量,按照1 :10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min,使细胞充分裂解。
4.14000×g,离心10min,转移上清液至新管中,进行下一步分析。
注:RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,该透明胶状物为基因团,属正常现象

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