产品概述

      碱性磷酸酶ALP几乎存在于身体各种组织中，是膜结合酶。肠上皮、肾小管、成骨细胞、肝脏、胎盘及白细胞中尤其丰富。血清中ALP主要来源于肝和骨。ALP与肠内脂质转移及骨质钙化有关。血清ALP测定对肝胆系统及骨骼系统疾病的研究有参考意义。

      碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定酶活力的高低。

      本试剂盒可测动物血清（浆）、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等。

包装信息

操作流程

一、样本前处理：
1. 血清（浆）：可直接取样用于测定（个别含量过高的样本需要稀释后测定，如鸡血清（浆）中ALP活力较高，一般需要用生理盐水5倍或10倍稀释后待测）。
2. 组织：准确称取待测组织的重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水进行匀浆，2500rpm，离心10min，取上清液进行测定。
3. 细胞培养液：吸取细胞培养液，1000-1500rpm，离心10min，取上清液进行测定。
4. 培养细胞：
a. 培养细胞的收集：
悬浮培养细胞：可直接通过离心收集沉淀细胞（1000rpm，离心10min，弃上清留沉淀细胞）。
贴壁培养的细胞：吸去上清，可通过细胞刮直接将细胞刮下，然后1000rpm，离心10min弃上清， 留沉淀细胞，再加入1mlPBS轻轻吹打，再次1000rpm，离心10min弃上清，留沉淀细胞待用。
b. 培养细胞的破碎：在细胞沉淀中加入一定量（10 8 的细胞一般加0.3-0.5ml）的缓冲液（缓冲液可以用 PBS或者是生理盐水），需保证超声探头在液面以下。功率300W，冰水浴，每3-5s超声一次，间隔4次 （每次间隔时间为30s左右）。

二、血清（浆）中ALP的测定，如下操作表：

细胞（培养上清）中ALP的测定，如下操作表：

三、计算公式:
1. 血清（浆）中ALP活力计算公式：
单位定义：100ml 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。

2. 组织样本中ALP活力计算公式：
单位定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。

3、培养液中ALP活力计算公式：
单位定义：100ml 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。

4、培养细胞中ALP活力计算公式：
单位定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。