产品概述

Western及IP细胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and IP）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中提取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。Western及IP细胞裂解液Western及IP细胞裂解液提取的蛋白可应用于PAGE、Western Blot、IP、co-IP等。

Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris (pH 7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，Na₃VO₄，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。

包装信息

操作流程

一、细胞样品
1.贴壁细胞蛋白抽提
（1）小心倾去贴壁细胞的培养液。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果，请先用预冷的 PBS漂洗细胞。

（3） 加入适量 Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1

（4）将Western及IP细胞裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
（1）悬浮细胞2500×g，离心5min，弃去上清。
（2）可选步骤：若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质，请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min，弃去上清。
（3）加入适量Western及IP细胞裂解液（使用前2-3min内加入PMSF），每5×10⁶细胞加入约200-500µl Western及IP细胞裂解液，吹打均匀。
（4）冰上放置20min，使细胞充分裂解
（5）14000×g，离心10min，转移上清液至新管中，进行下一步分析。
二、组织样品
1.取适当的Western及IP细胞裂解液 ，在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入Western及IP细胞裂解液后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min，使细胞充分裂解。