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产品概述

WesternIPCell lysis buffer for Western and IPWesternIPWesternIPPAGEWesterBlotIPco-IP

Western及IP细胞裂解液20mM Tris (pH 7.5)150mM NaCl1% Triton X-100sodium pyrophosphateβ-glycerophosphateNa3VO4EDTAleupeptin

包装信息

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操作流程

一、细胞样品
1.贴壁细胞蛋白抽提
(1)小心倾去贴壁细胞的培养液。
(2)可选步骤:若培养基中含有酚红或蛋白则可能干扰实验结果,请先用预冷的 PBS漂洗细胞。

(3) 加入适量 Western及IP细胞裂解液(使用前2-3min内加入PMSF),在冰上用枪头吹打贴壁细胞。试剂使用量请参考表1

 

(4)将Western及IP细胞裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20min,使细胞充分裂解。
(5)14000×g,离心10min,转移上清液至新管中,进行下一步分析。
2.悬浮细胞蛋白提取
(1)悬浮细胞2500×g,离心5min,弃去上清。
(2)可选步骤:若培养基中含有酚红或蛋白可能干扰实验结果的物质,请使用预冷的PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g , 离心5min,弃去上清。
(3)加入适量Western及IP细胞裂解液(使用前2-3min内加入PMSF),每5×106细胞加入约200-500µl Western及IP细胞裂解液,吹打均匀。
(4)冰上放置20min,使细胞充分裂解
(5)14000×g,离心10min,转移上清液至新管中,进行下一步分析。
二、组织样品
1.取适当的Western及IP细胞裂解液 ,在使用前2-3min内加入PMSF。
2.称量实验组织的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入Western及IP细胞裂解液后将组织剪成细小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3.冰上孵育20min,使细胞充分裂解。

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