产品概述

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提 DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT）的催化下加上绿色荧光探针FITC标记的dUTP，之后经过POD转换试剂将信号转化成显色反应，方便结果的分析与保存。

Tunel细胞凋亡检测试剂盒不依赖生物素系统进行末端标记，避免了内源性生物素产生的高背景等问题。

包装信息

操作流程

1. A. 对于贴壁细胞：（最好用细胞爬片）

a. 接种于24/48/96孔板的细胞用PBS漂洗5min。
b. 预冷的4%多聚甲醛于4℃固定细胞30-60min。
c. PBS漂洗细胞3次，每次5min。
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X-100 的 PBS（现用现配），冰浴2-5min。
e. 转至步骤2。
1. B. 对于悬浮细胞：
a. 收集0.5-2×10⁶ 个细胞，PBS漂洗一次，1000rpm 离心5min 。
b. 预冷的4%多聚甲醛于4℃固定细胞30-60min。
c. PBS漂洗一次1000rpm 离心5min。
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X -100的PBS（现用现配），冰浴2-5min 。
e. 转至步骤2。
1. C. 对于石蜡切片：
a. 脱蜡，组织切片置于60℃恒温箱，烤片30-60min，浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次。
b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次。
c. 水化，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（90%，80%，70%，50%），室温下每步放置3min。
d. 组织切片浸入PBS，室温放置5min。

e. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。（对于有些组织可以用1xProteinase K进行通透，即每个组织滴加50μl用PBS稀释的1×Proteinase K，室温静置15-30min，具体通透时间因组织而异，需要自行摸索）

f. 组织切片浸入PBS室温放置5min重复漂洗3次，如果用Proteinase K通透则必须彻底去除残留Proteinase K否则影响后续实验结果。
g. 转至步骤2。
1. D. 对于冰冻切片：
a. 预冷的4%多聚甲醛于4℃固定切片30-60min。
b. 组织切片浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗2次。
c. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。
d. 组织切片浸入PBS室温放置5min重复漂洗3次，如果用Proteinase K通透则必须彻底去除残留Proteinase K，否则影响后续实验结果。
e. 转至步骤2。
2. 每个组织或细胞样本滴加50μl 3%H₂O₂，室温避光静置10min。

3. 组织切片或细胞浸入PBS，室温避光放置5min，重复漂洗2次。
4. 阳性对照（选做）：阳性对照的组织滴加50μl阳性对照缓冲液 （24孔板每孔大概需要100-150μl）室温静置10min，浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。

注：为避免交叉污染，阳性对照组请用单独的染色缸漂洗！
5. 每个组织滴加50μl Tunel反应缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl），37℃，避光孵育60-90min。

6. 阴性对照（选做）：用于进行阴性对照的组织或细胞滴加不含10×Enzyme Reagent的Tunel反应缓冲液（45μl1×Labeling Substrate与5μl去离子水混合），37℃，避光孵育60-90min。
7. 组织切片或细胞浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。
8. 每个组织滴加50μl POD转换缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl），37℃，孵育30min。

9. 组织切片或细胞浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。
10. 每个组织或细胞样本滴加50 μl DAB显色剂（24孔板每孔大概需要100-150)，室温孵育2-5min，根据实际显色情况自行摸索显色时间。

11. 复染细胞核：用苏木素复染细胞核（组织染色1min，细胞染色数秒）。 

12. A. 对于贴壁细胞或细胞涂片。

蒸馏水返蓝后用50%甘油封片，随即进行显微镜观察。

12. B. 对于切片：

用1%盐酸酒精分化数秒，自来水返蓝。之后进行以下步骤：

a. 脱水，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（50%，70%，80%，90%），室温下每步放置3min。

b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次。

c. 透明，组织切片浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次。

d. 中性树胶封片，通风橱内晾干，置于显微镜下观察 。

产品图片：