简述实验条件：上海某大学使用博鹭腾超敏型ECL发光液测试磷酸化蛋白P-stat3的测试结果ECL发光液使用说明及注意事项上下滑动阅读更多内容使用说明1．按常规 Western blot 操作进行，二抗孵育后，在进行最后一次洗涤时根据膜的大小（每 10cm² 膜混合 0.5 mL Solution A 和 0.5 mL Solution B），按照 Solution A: Solution B=1:1 比例配制发光检测工作液。注：工作液建议现配现用，配制后室温放置数小时后灵敏度可能略有降低。2. 用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上，用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上，使其均匀覆盖，室温孵育 2 min。注：增加孵育时间不会增加灵敏度，有时还会导致条带曝光时显示异常。发光过程的本质是酶促反应，加入发光液过少同样不利反应进行，会导致膜上条带曝光不均和灵敏度明显降低。3. 用平头镊子夹持蛋白膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的发光液。将膜的蛋白面朝上并包裹于洁净保鲜膜内，轻轻赶出气泡。4. 压片检测：将膜固定在暗盒后，暗房内取出 X 光胶片放置暗盒中压片 1 分钟，立即显影定影，根据其曝光结果，缩短或延长下一张 X 光胶片的压片时间。
