本试剂盒是用于提取动物组织、血液、革兰氏阴性细菌及培养细胞等基因组DNA的提取试剂盒。试剂盒由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA,再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便等特点。使用本试剂盒可从2~25 mg的动物组织、50~100μl的哺乳动物全血(含抗凝剂)、1~10μl的有核红细胞全血(含抗凝剂)、1.0~5.0×109的革兰氏阴性细菌、1.0×105 ~1.0×107的培养细胞中纯化得到高纯度基因组DNA。
包装信息
实验前的准备
1. 准备56°C水浴。
2. 溶液GL若出现沉淀,请于65°C加热溶解,待恢复至室温后使用。
3. 漂洗液WB在首次使用前,请添加56 ml的100%乙醇,混合均匀。
4. 洗脱结合于DNA制备膜上的基因组DNA时,将洗脱液或灭菌蒸馏水加热至65°C使用会提高基因组DNA的洗脱效率。
操作方法
1. 组织或细胞的裂解:
使用不同的实验材料需采用不同的裂解步骤,具体说明如下:
◆动物组织的裂解:(具体操作步骤请参照本公司组织基因组DNA提取剂盒 货号为WLA058)
◆全血的裂解:(具体操作步骤请参照本公司全血基因组DNA提取试剂盒 货号为WLA057)
◆E.coli等革兰氏阴性菌的裂解:(具体操作步骤请参照本公司细菌基因组DNA小量纯化试剂盒 货号为WLA054)
◆悬浮培养的动物细胞的裂解:
① 用1.5 ml Tube收集1.0×105 ~1.0×107的细胞悬浮液,5,000 rpm离心5分钟,弃上清(细胞培养液)。
② 加入200 μl的灭菌水或PBS溶液悬浮细胞。
③ 加入180 μl的溶液GB、20 μl的Proteinase K和10μl的RNase A(10 mg/ml),吸打混匀,于56℃水浴温浴10分钟。
④ 向裂解液中加入200 μl 100%乙醇,充分吸打混匀。
◆贴壁细胞的裂解:
① 弃尽培养液,向每10 cm2的贴壁细胞中加入1 ml PBS,用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞,转移至1.5 ml Tube中,5,000 rpm离心5分钟,弃上清,加入200 μl的灭菌水或PBS溶液悬浮细胞。
② 加入180 μl 溶液GB、20 μl的Proteinase K和10μl的RNase A(10 mg/ml),收集细胞悬液,充分吸打混匀,于56℃水浴温浴10分
钟。
③ 向裂解液中加入200 μl 100%乙醇,充分吸打混匀。
2. 将吸附柱安置于收集管上,溶液移至吸附柱中,12,000 rpm离心2分钟,弃滤液。
3. 将500 μl的溶液WA加入至吸附柱中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。
4. 将700 μl的溶液WB加入至吸附柱中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。
注)请确认溶液WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。
请沿吸附柱管壁四周加入溶液WB,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
5. 重复操作步骤4。
6. 将吸附柱安置于收集管上,12,000 rpm离心2分钟。
7. 将吸附柱安置于新的1.5 ml的离心管上,在吸附柱膜的中央处加入50~200 μl的灭菌水或洗脱液EB,室温静置5分钟。
注)将灭菌水或洗脱液EB加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
8. 12, 000 rpm离心2分钟洗脱DNA。
如需获得更大收量,可将离下液重新加入到吸附柱膜的中央或再加入50~200 μl的灭菌水或洗脱液EB,室温静置5分钟后,12,000 rpm离
心2分钟洗脱DNA。
9. 基因组DNA定量。
提取得到的基因组DNA可通过电泳或吸光度测定以定量。