1. 全程低温操作。

2. 微量制备比大规模制备操作更方便和快速，因而更容易获得完整的线粒体。

3. 在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在相差显微镜下检查未裂解细 胞应在50%左右即可。过度研磨将破坏线粒体，研磨不足将降低得率。

4. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。相对离心力RCF值（g值）取决于转子的转速 （rpm）和旋转半径（r，以mm计算），可用如下公式表示：RCF=1.11×10-6（rpm） 2×r。

5. 进行Western Blot和2D电泳，可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。

6. PMSF一定要在裂解液加入到样品中前2-3min内加入，以免PMSF在水溶液中不稳定而失效。

7. 本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果较差。