免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）是研究蛋白质间相互作用的一种常用方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc段结合的prorein A+G，形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein A+G小珠”复合物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Western blot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。
包装信息
1. 除去细胞培养基，用预冷的PBS（需自备）洗涤细胞两次。
2. 加入预冷的裂解液(见表1)，冰育5min。
3. 用预冷的细胞刮将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5ml EP管中，缓慢晃动10min。
4. 4℃，14000×g离心15min，将上清转移至新的离心管中。
5. 准备Protein A beads，用1ml PBS清洗三次（3000×g离心1min）后保存备用，此步骤可提前准备。
6. 每1ml总蛋白中加入60μl Protein A beads，以去除非特异性杂蛋白，降低背景。 7. 4℃，14000×g离心15min，将上清转移到一个新的离心管中，去除Protein A beads。
8. 做蛋白标准曲线，测定蛋白浓度。
① 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积试剂A加1体积试剂B(50：1)配制适量工作液，充分混匀。
② 稀释标准品：取10µl标准品稀释到100µl，使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0、1、2、4、 8、12、16、20µl加到96孔板的蛋白 标准品孔中，再用PBS补足至20µl。
③ 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，再用PBS溶液补足至20µl。
④ 向各孔加入200µl工作液，37℃放置30min(也可室温放置2h)。
⑤ 用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
9. 用PBS将总蛋白稀释到约1 μg/μl，如果目的蛋白在细胞中含量较低，则总蛋白浓度应该稍高（如10 μg/μl）。
10. 加入2μg抗体到500μl总蛋白中，用摇床缓慢摇动抗原抗体混合物，4℃过夜。 11. 加入60μl Protein A beads来捕捉抗原抗体复合物，室温缓慢摇动抗原抗体混合物2h。
12. 用预冷PBS清洗三次（3000×g离心1min），收集琼脂糖珠-抗原抗体复合物，弃上清 。
13. 用20μl 5×上样缓冲液将琼脂糖珠-抗原抗体复合物悬起，轻轻混匀，缓冲液的量依据上样多少的需要而定。
14. 将上样样品煮沸5min，以游离抗原，抗体，珠子，3000×g离心1min，收集上清，也可以暂时于-20℃保存，留待以后电泳，电泳 前应再次煮沸5min。
